Фитохимическое изучение зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L

Фитохимическое изучение зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum LФитохимическое изучение зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.) флоры Башкортостана и перспективы создания на его основе новых лекарственных средств [Электронный ресурс] Файзуллина Рената Ринатовна.

Содержание к диссертации.

Глава I. Обзор литературы. 10.

1.1. Зверобой продырявленный (hypericum perforatum l.) Во флоре башкортостана. 10.

1.2. Биологически активные соединения зверобоя продырявленного и их фармакологические свойства. 13.

1.3. Лекарственные средства на основе зверобоя продырявленного на фармацевтическом рынке России. 23.

1.4. Современные подходы к стандартизации лекарственных средств на основе растительного сырья. 27.

Глава II. Материалы и методы исследования. 31.

2.1. Объекты исследования. 31.

2.2. Методы исследования. „-.’ .31.

2.2.1. Методы качественного анализа биологически активных соединений. 32.

2.2.2; методы количественного анализа биологически активных соединений. 3s.

2.2.3. Методы технологических исследований. ;. 40.

Глава III. Фитохимическое изучение травы зверобоя продырявленного флоры башкортостана. . 42.

3.1. Определение числовых показателей травы зверобоя. 42.

3.2. Качественный анализ основных групп бас травы зверобоя 43.

3.3. Хроматографические исследования и идентификация основных бас травы зверобоя продырявленного флоры башкортостана 45.

3.4. Количественный анализ основных групп бас в траве зверобоя продырявленного флоры башкортостана. 57.

3.5. Газохроматографическое изучение эфирного масла травы Зверобоя продырявленного флоры башкортостана 65.

3.6. Использование результатов исследования травы зверобоя Продырявленного флоры башкортостана в практике 74.

Выводы по главе. 80.

Глава IV. Фитохимическое изучение сухого полиэкстракта из травы зверобоя продырявленного 81.

4.1. Определение выхода экстрактивных веществ в полиэкстракт зверобоя сухой. 84.

4.2. Определение числовых показателей полиэкстракта зверобоя сухого. 85.

4.3. Определение минерального состава сухого полиэкстракта зверобоя 87.

4.4. Фитохимический анализ отдельных групп биологически активных соединений в полиэкстракте зверобоя 88.

4.4.1. Хроматографические и спектральные исследования полиэкстракта зверобоя. 88.

4.4.2. Количественный анализ полиэкстракта зверобоя 93.

4.5. Использование результатов исследования полиэкстракта зверобоя сухого в практике 100.

Выводы по главе 104.

Глава V. Разработка состава пенообразующих внутриматочных таблеток с полиэкстрактом зверобоя сухим 105.

5.1. Определение технологических показателей сухого полиэкстракта зверобоя продырявленного 106.

5.2. Разработка состава пенообразующих вагинальных таблеток. 107.

5.3. Стандартизация пенообразующих вагинальных таблеток с экстрактом зверобоя 116.

5.4. Установление срока годности пенообразующих вагинальных таблеток 119.

Выводы по главе. 122.

Общие выводы 123.

Введение к работе.

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. По данным ВОЗ, во многих странах мира отмечен рост вагинальных инфекций, занимающих ведущее место в структуре гинекологических заболеваний. Это связано с ранним началом половой жизни, частой смене партнеров, бесконтрольным приемом антибиотиков, снижением общего иммунного статуса организма. Чаще всего половая инфекция обусловлена несколькими патогенными факторами — вирусами, микробами, грибами, простейшими.

Традиционное лечение неспецифических воспалительных.

гинекологических заболеваний не всегда приводит к желаемому результату, т.к. оно зачастую локальное, без функционального, этиопатогенетического подхода, что ведет к недостаточной эффективности, применяемых методов лечения и рецидивам.

Тенденция развития лекарственной терапии последних десятилетий характеризуется значительным использованием в медицине фитопрепаратов. Это объясняется прежде всего тем, что препараты растительного происхождения лучше переносятся больными, обычно не вызывают аллергических реакций и не оказывают побочного действия.

Одним из самых широко используемых лекарственных растений, как в народной, так и в научной медицине при различных заболеваниях является зверобой продырявленный (Hypericum perforatum L.). В последние годы возрос интерес к антрахиноновым пигментам зверобоя продырявленного — гиперицинам, т.к. у гиперицинсодержащих препаратов установлена противомикробная, противовирусная и антиканцерогенная активность. В тоже время, несмотря на широкий изученный спектр фармакологической активности зверобоя продырявленного, число промышленно выпускаемых официнальных препаратов из него весьма ограничено (настойка, экстракт), а противомикробные средства «Иманин» и «Новоиманин» сняты с производства.

Зверобой продырявленный имеет обширную сырьевую базу на территории Республики Башкортостан (РБ) и может служить доступным источником для получения противомикробных препаратов. Это очень важно, т.к. в РБ в настоящее время решается вопрос о расширении ассортимента собственного фармацевтического производства. Поэтому изучение накопления биологически активных соединений (БАС) в растении в условиях данного региона и предложение методов стандартизации сырья и препаратов зверобоя продырявленного по содержанию антрахиноновых пигментов является актуальной задачей.

Перспективным также является разработка рациональной лекарственной формы на основе зверобоя продырявленного для комплексного лечения вагинальных инфекций, обладающей противомикробным, противовирусным, иммуномодулирующим.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью исследования является фитохимическое изучение зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.), произрастающего на территории Башкортостана; изыскание дополнительных методов стандартизации сырья и разработка нормативной документации на сухой полиэкстракт зверобоя продырявленного, а также создание оптимальной лекарственной формы на основе полученного полиэкстракта. В связи с этим, предстояло решить следующие задачи.

— провести фитохимическое исследование зверобоя продырявленного флоры.

Башкортостана и предложить методы стандартизации по количественному содержанию гиперицинов.

— провести фитохимическое исследование сухого полиэкстракта зверобоя.

предложить методы его стандартизации по гиперицинам и сумме флавоноидов; разработать нормативную документацию на сухой полиэкстракт зверобоя как субстанцию для получения противомикробных лекарственных средств.

7 — изучить возможность получения рациональной лекарственной формы на.

основе сухого полиэкстракта зверобоя и предложить методы ее.

стандартизации. НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Изучен состав основных БАС травы зверобоя продырявленного флоры Башкортостана, свидетельствующий о его доброкачественности и возможности использования в качестве источника для получения противомикробных средств. Выделены и идентифицированы: флавоноиды — рутин, кверцетин, лютеолин, гиперозид; антраценпроизводные — гиперицин, псевдогиперицин; фенилпропаноиды — кофейная и хлорогеновая кислоты; кумарин — умбеллиферон. Предложен метод количественного определения гиперицинов для дополнительной стандартизации сырья зверобоя продырявленного, а также сухого полиэкстракта зверобоя.

Впервые с использованием современных методов анализа изучен качественный состав эфирного масла травы зверобоя продырявленного флоры Башкортостана. Идентифицировано 85 компонентов и установлено, что в составе эфирного масла преобладают сесквитерпеновые углеводороды, из которых в максимальном количестве содержится кариофиллен оксид.

Впервые изучен химический состав сухого полиэкстракта из травы зверобоя продырявленного. Выделены и идентифицированы 7 индивидуальных соединений, относящихся к группе флавоноидов (рутин, кверцетин, лютеолин, гиперозид), фенилпропаноидов (хлорогеновая и кофейная кислоты), кумаринов (умбеллиферон), антраценпроизводных (гиперицин, псевдогиперицин.

Теоретически и экспериментально, с использованием метода математического планирования (латинский квадрат без повторных опытов), обоснована возможность получения лекарственной формы на основе сухого полиэкстракта зверобоя для применения в гинекологии — пенообразующие вагинальные таблетки. Установлены их показатели качества и срок хранения.

СВЯЗЬ ЗАДАЧ ИССЛЕДОВАНИЯ С ПРОБЛЕМНЫМ ПЛАНОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований Башкирского государственного медицинского университета по проблеме «Фармакология и фармация» и является фрагментом исследований кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии (номер государственной регистрации № 01990003625), государственной научно-технической программы Республики Башкортостан. «Государственные приоритеты здоровья населения республики Башкортостан. Профилактика заболеваний и здоровый образ жизни» (номер государственной регистрации № 01200012029.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Обоснована целесообразность использования зверобоя продырявленного флоры Башкортостана в качестве источника доброкачественного сырья для получения лекарственных препаратов.

Методика количественного определения гиперицинов апробирована, в работе ЗАО «Фармацевтическая Компания «Бионорм» и рекомендована для включения в нормативную документацию (приложение 5.

На основе полученных результатов разработаны проекты фармакопейных статей предприятия «Herba Hyperici — трава зверобоя», «Extractum Hyperici siccum — экстракт зверобоя сухой»,.«Tabuletta spiimatae vaginalia cum extracto Hyperici sicco 0,2 — таблетки вагинальные с экстрактом зверобоя сухим 0,2» (приложение 2.

Осуществлен выпуск опытной партии пенообразующих вагинальных таблеток с полиэкстрактом зверобоя сухим (приложение 6.

Результаты исследований используются в научных исследованиях и учебном процессе на кафедре фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии Башкирского государственного медицинского университета (приложение 4.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертационной работы были доложены и обсуждены на научной конференции студентов и.

9 молодых ученых БГМУ (Уфа, 2001 — 2004 гг.); VI Международном съезде «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (Санкт-Петербург, 2002); научно-практической конференции посвященной 20-летию фармацевтического факультета БГМУ (Уфа, 2002); региональной научно-практической конференции «Технология выращивания и использование лекарственных культур» (Уфа, 2003); на совместном заседании кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии, фармацевтической химии с курсами аналитической и токсикологической химии, управления и экономики фармации, технологии лекарственных форм с курсом биотехнологии (Уфа, 2005.

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 9 работ, в которых отражены основные результаты исследования.

Лекарственные средства на основе зверобоя продырявленного на фармацевтическом рынке России.

Широкий спектр лечебного действия зверобоя продырявленного привлекли внимание многих исследователей, в результате чего появился ряд препаратов из этого растения. Все существующие лекарственные средства на основе зверобоя можно разделить на несколько групп по оказываемому фармакологическому эффекту.

Наиболее известной является группа антибактериальных препаратов. В институте микробиологии АН УССР был разработан и внедрен в медицинскую практику антимикробный препарат «Иманин», который применялся около 20 лет. Это комплексный препарат, содержащий дубильные вещества, хлорофилл и продукты его гидролиза. Установлена чувствительность к иманину большого числа штаммов стафилококков и стрептококков, вне зависимости от устойчивости этих бактерий к любым другим антибиотикам, в том числе и полирезистентных штаммов. Кроме того, у препарата «Иманин» выявлена противовирусная активность в отношении вируса гриппа [4]. В начале 60-х гг. был получен антимикробный препарат «Новоиманин» (Р.64.714.23) — более высокоактивное и устойчивое при хранении антибактериальное средство.

К этой же группе также относятся экстемпоральная лекарственная форма из травы зверобоя продырявленного — настой, а также получаемая в промышленных условиях настойка на 40% этиловом спирте в соотношении Г.5 (ФС 42-1889-82; Р. 67.554.136), основным фармакологическим действием которых считается противомикробное.

В Казахстане выпущен препарат антибактериального и противовоспалительного действия под названием «Кызыл-Май», стандартизируемый по гиперицину [70.

Ко второй группе можно отнести препараты, обладающие антидепрессивным действием, обусловленное гиперицином. Проведенные исследования показали, что эффективность препаратов гиперицина при депрессии средней и легкой степени сходна с таковой у амитриптилина [71.

В настоящее время на фармацевтическом рынке РФ присутствует ряд зарубежных препаратов, применяемых для лечения депрессивных состояний — «Негрустин» (П.№ 014366/01 «Гексал АГ» / Германия), «Деприм» (П.№ 009532 «Лек.д.д.» / Германия), «Гелариум Гиперикум» (П.№ 014575/01-2003 «Бионорика АГ» .7 Германия), комплексный препарат «Ново-Пассит» (П.№ 014519/01-2002 «Айвекс Ч.Р.»7 Чешская республика) [3, 58.

В третью группу входят не теряющие актуальности комплексные лекарственные, средства и. сборы, содержащие траву зверобоя продырявленного и применяемые как желчегонные, вяжущие, мочегонные и литолитйческие средства: сбор «Бруснивер» и «Бруснивер-Т», «Гастрофит», сбор № 2,3 [3]. До 2002 г. выпускался препарат «Гифларин» (раствор для инъекций), действующим веществом которого является гиперозид. После клинического изучения «Гифларин» был рекомендован для лечения гломеруло- и пиелонефритов, нефрозов, всех. стадий хронической почечной недостаточности.

Четвертую группу можно определить как группу маркерных препаратов. Так в основу создания препарата «Гиперфлав» были заложены фотосенсибилизирующие и флуоресцентные свойства, гиперицинов травы зверобоя продырявленного. Весьма важным свойством гиперицинов является их способность селективно накапливаться в опухолевых клетках и. по сравнению с известными порфириновыми маркерами, значительно быстрее выводиться из организма. «Гиперфлав» предназначен для дифференциальной флуоресцентной диагностики язвенной болезни и новообразований ранних стадий желудочно-кишечного тракта и является очищенным сухим экстрактом травы зверобоя продырявленного; в одной капсуле наряду с суммой флавоноидов содержится 4 мг гиперицинов [18.

Перспективным является создание группы иммуномодулирующих препаратов на основе зверобоя продырявленного. Имеются данные.

свидетельствующие о том. что препараты. из зверобоя «Иманин» и «Новоиманин», наряду с антибактериальной активностью, также оказывают положительное влияние на состояние ретикуло-эндотелиальной системы (РЭС) у лабораторных животных, повышая их иммунный статус [4.

Иммунопозитивный эффект зверобоя продырявленного отмечен ив клинической практике: местное и энтеральное применение 3%-ного водного экстракта зверобоя больными с гнойно-воспалительными заболеваниями сопровождалось, наряду с клиническим улучшением, нормализацией иммунограммы, в частности показателей фагоцитоза и пролиферативной активности лимфоцитов [36.

В дальнейшем, выяснилось, что влияние зверобоя на иммунную систему двояко и зависит от группы действующих веществ. Полифенольная фракция (ПФ) из травы зверобоя, содержащая как конденсированные, антраценпроизводные, так и флавоноиды, при введении в дозе 1/100 — 1/25 DL50 повышала клеточный иммунитет. Иммуностимулирующий эффект ПФ наблюдался и в случае гуморального ответа. Липофильная фракция (ЛФ), содержащая эфирные масла, жирорастворимые витамины, фитостерины напротив, в зависимости от дозы угнетала формирование ГЗТ-реакции, причем наибольший эффект отмечался при введении низшей дозы продукта (1/100 DL50). Иммуносупрессивное действие ЛФ наблюдалось также и в случае гуморального ответа [36,113.

Не обойдено вниманием исследователей и противовоспалительное действие зверобоя продырявленного. К настоящему времени разработан ряд экстракционных препаратов этой группы из травы зверобоя. Так, в состав таблеток «Сибектан» (Р. 001213/01-2002), применяемых как противовоспалительное средство, входит сухой экстракт зверобоя (ВФС 42-2733-96), способ получения которого разработан в НПО ВИЛР [25 ,26.

Методы качественного анализа биологически активных соединений.

Хроматографическое исследование травы зверобоя и сухого полиэкстракта зверобоя проводили методами восходящей одномерной и двумерной хроматографии на бумаге (БХ), бумага — хроматографическая Санкт-Петербургской фабрики № 2 марки «С» и «М»; в тонком закрепленном слое сорбента (ТСХ) — на пластинках «Silufol», «Silufyx» (Чехия) [27, 52, 56, 82, 100]. При необходимости через хроматограмму повторно пропускали разделяющую систему, что обеспечивало более четкое разделение при близких значениях Rf.

Для хроматографического исследования сумму флавоноидов из травы зверобоя получали последовательной экстракцией 40 %, 70 % и 96 % этиловым спиртом (по типу полиэкстракта) для наиболее полного извлечения всех групп флавоноидов. Полученные извлечения объединяли, сгущали, освобождали от липофильной фракции хлороформом и обрабатывали этилацетатом и н-бутанолом [42.

Для анализа гиперщинов сырье предварительно обрабатывали хлороформом и экстрагировали 70 % этиловым спиртом, последний отгоняли и водный остаток обрабатывали этилацетатом. Полученное извлечение использовали для хроматографирования [49.

Коричные кислоты извлекали горячей водой из сырья освобожденного от липофильной фракции хлороформом. Экстракцию повторяли трижды. Водные извлечения объединяли, охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через бумажный фильтр. Фильтрат трижды обрабатывали диэтиловым эфиром. Эфирные извлечения объединяли, сушили безводным натрия сульфатом, фильтровали. Эфир отгоняли, сухой остаток растворяли в 96 % этиловом спирте и использовали для хроматографирования [74.

Полученную для проведения качественных реакций сумму кумаринов использовали также и для хроматографического анализа.

Для хроматографического исследования сухого полиэкстракта использовали этилацетатные извлечения из 70 %, 30 % этанольных фракций. Для этого каждую сгущенную водно-спиртовую фракцию обрабатывали этилацетатом и полученные извлечения использовали для хроматографии.

Для выделения суммы флавоноидов из 70 % и 30 % этанольных фракций полиэкстракта этилацетатные извлечения из этих фракций сгущали под вакуумом на роторном испарителе до полного удаления растворителя. Полученный остаток растворяли в 96 % этиловом спирте и использовали для хроматографирования.

Навеску ацетоновой фракции 0,1 г растворяли в 10 мл ацетона и использовали для хроматографирования. В эксперименте использовались следующие системы растворителей [9, 42,49,52,82]: для хроматографии на бумаге: 1.15% раствор уксусной кислоты 2. 2 % раствор уксусной кислоты 3. Н-бутанол — уксусная кислота — вода (4:1:5) 4. Н-бутанол — уксусная кислота — вода (3:6:1) 5. Толуол — этилформиат — муравьиная кислота (5:4:1) 6. Хлороформ 7. Петролейный эфир для хроматографии в тонком слое сорбента: A. Этилацетат — 85 % муравьиная кислота (50:6); Б. Хлороформ — этиловый спирт (8:2); B. Этилацетат — этиловый спирт — вода (10:2:1); Г. Этилацетат — уксусная кислота (8:2); Д. Бензол — уксусная кислота (5:2); Е. Этилацетат-н-бутанол-муравьиная кислота-вода (5:3:1:1) Для проявления хроматограмм использовали реактивы: а. Алюминия (III) хлорид, 5 % раствор в этиловом спирте; б. Аммиака 25 % водный раствор; в. Железа (III) хлорид, 3 % водный раствор; г. Натрия гидроксид, 10 % водный раствор; д. Диазотированная сульфаниловая кислота; е. Натрия гидроксид, 10 % спиртовый раствор. Вещества детектировали просматривая хроматограммы в видимом и УФ-свете, до и после проявления. Для этого использовали ртутно-кварцевую лампу со светофильтром, при длине волны 365 нм.

Для сравнительной хроматографии и идентификации природных веществ использовали аутентичные образцы («свидетели»): кверцетин, гиперозид, рутин, лютеолин; кофейную и хлорогеновую кислоты; умбеллиферон, полученные из Государственного ботанического сада Сибирского отделения РАН, НПО ВИЛАР, Института органической химии (г. Иркутск.

Выделение индивидуальных веществ и их идентификация.

Получение индивидуальных соединений группы гиперицинов, флавоноидов, кумаринов и фенилпропаноидов (коричных кислот) проводили методом препаративной хроматографии в тонком слое сорбента силикагеля (пластинки «Silufol UV-254» (Чехия)) [52.

После разделения суммарных экстрактов флавоноидов, кумаринов, гиперицинов и коричных. кислот в подходящей системе растворителей хроматограммы детектировали в УФ-свете. Зоны, соответствующие гиперицинам, флавоноидам и коричным кислотам счищали с пластинок. Пятна, имеющие одинаковое значение Rf и сходную окраску (флуоресценцию) в видимом и УФ-свете, объединяли и элюировали этиловым спиртом или другими растворителями.

Хроматографические исследования и идентификация основных бас травы зверобоя продырявленного флоры башкортостана.

Для хроматографического изучения флавоноидов использовали очищенные этанольное, этилацетатное, н-бутанольное извлечения из травы зверобоя (гл. 2.2.1.). Анализ проводили методом одномерной и двумерной хроматографии на бумаге и в тонком слое сорбента в системах 1-3 и А-Д соответственно. Хроматограммы проявляли хромогенными реактивами а,б,в,г (гл. 2.2.1.) и просматривали в видимом и УФ-свете до и после проявления.

В исследованных фракциях наблюдали (БХ, система 3) пятна с Rf: 0,0; 0,07; 0,37; 0,51; 0,73; 0,86. При этом в этилацетатной фракции наблюдали 6 пятен, а в бутанольной — 3. Использование двумерной БХ (1 направление -система 3; 2 — система 1) позволило разделить пятно с Rf0,86 — проявилось 3 пятна с Rf 0,03; 0,10; 0,15. Хроматографическое поведение, окраска пятен в УФ — свете до и после проявления хромогенными реактивами а,б,в (усиление желтой окраски, появление желто-зеленой окраски) позволяют отнести вещества с Rf 0,37; 0,51; 0,73; 0,86 к флавонолам и флаванонам. В сравнении с аутентичными образцами идентифицировали рутин, кверцетин, гиперозид, лютеолин.

Использование ТСХ (система А) позволило установить присутствие в этилацетатном извлечении веществ с Rf 0,20; 0,44; 0,61; 0,70; 0,81; 0,87; 0,95; в бутанольной фракции при использовании данной системы разделения суммы веществ не наблюдалось. При разделении в системе Б обнаружены вещества с Rf 0,0; 0,08; 0,24; 0,37; 0,53; 0,97 (этилацетатная фракция); 0,06; 0,98 (бутанольная фракция). Хроматографическое поведение, окраска пятен в видимом и УФ-свете до и после проявления хромогенными реактивами (а, б, в, г) сравнение с аутентичными образцами позволило установить присутствие веществ флавоноидной природы — рутина, кверцетина, гиперозида, лютеолина. В этилацетатном извлечении также по характерной красной окраске пятен в видимом свете и ярко-красному свечению в УФ-свете обнаружили гиперицины (Rf 0,87; 0,81 в системе A; Rf 0,37; 0,97 в системе Б). На рисунке 3.2. представлена схема хроматограммы в тонком слое в системе А.

Для подтверждения- присутствия в траве зверобоя гликозидов рутина, гиперозида и агликонов кверцетина, лютеолина они были выделены препаративно из очищенных суммарных экстрактов флавоноидов (гл. 2.2.1) с использованием ТСХ и системы А. Выделенные вещества очищали повторной кристаллизацией из метилового и этилового спирта.

Для идентификации и установления чистоты изолированных веществ нами было проведено хроматографическое исследование в тонком слое (система А) проб «смешения» с аутентичными образцами, определена температура плавления (в том числе и проб «смешения») и проведен УФ-спектральный анализ (табл. 3.3. рис. 3.3. — 3.4.). На полученных хроматограммах отсутствовали дополнительные пятна, а при определении температуры плавления проб «смешения» не наблюдалась депрессии, что свидетельствует о чистоте полученных образцов БАС.

Для подтверждения структуры выделенных веществ при их идентификации нами также был использован метод хромато-масс-спектрометрии (гл. 2.2.1.

Вещества, имеющие Rf 0,20; 0,44; 0,70; 0,95 (ТСХ, система А) счищали с пластинок, объединяли и элюировали горячим этиловым спиртом 96 %. Так как исследуемые этим методом образцы веществ должны быть летучими, термически стабильными и иметь хорошие хроматографические свойства [19], предварительно мы провели силилирование выделенных образцов [35.

Определение минерального состава сухого полиэкстракта зверобоя.

Около 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья обезжиривали дихлорметаном в аппарате Сокслета, до обесцвечивания растворителя. Затем, высушенное на воздухе обезжиренное сырье также в аппарате Сокслета экстрагировали ацетоном. Полученный ацетоновый экстракт выпаривали под вакуумом до сухого состояния. Сухой экстракт растворяли в 15 мл этилового спирта 96 % и доводили раствор тем же растворителем до 25 мл. 10 мл этого раствора фильтровали (раствор А), первые 2 мл отбрасывали. 5 мл раствора А вносили в мерную колбу на 25 мл и доводили до метки тем же растворителем (раствор Б). Поглощение раствора Б измеряли при 590 нм в сравнении с этиловым спиртом. Содержание гиперицинов в % рассчитывали по формуле: E — измеренная абсорбция; А — навеска сырья, г; 870 — удельный показатель поглощения гиперицина в метаноле; w — влажность, %. Нами определялось содержание гиперицина также по методике 5, которая является более простой в исполнении и более экономичной (глава 2.2.2). Результаты представлены в таблице 3.5. Таким образом, замена в методике растворителя метилового спирта на 96 % этиловый является допустимой.

Количественное содержание гиперицинов в траве зверобоя флоры Башкортостана при использовании приведенных методик составило от 0,080 % ± 0,001 % до 0,091 % ± 0,004 %. Максимальное количество гиперицинов содержится в образцах сырья, собранного в Уфимском районе.

Для введения показателя содержания гиперицинов в нормативную документацию нами было проведено сравнение методики 4 (модифицированной) и 5 по воспроизводимости (ГФ СССР XI изд. ч. 1, с. 208). Данные сравнения воспроизводимости приведенных методик представлены в таблице 3.б.

Согласно полученным данным, заключение о различии воспроизводимости данных методик сделать нельзя, т.к. выполняется неравенство FBbI4 F(Pf[f2) и различие значений Si и S г не может быть признано значимым. Следовательно, обе методики являются равнозначными по достоверности.

Для определения количественного содержания гиперицинов в полиэкстракте зверобоя продырявленного нами была выбрана методика 4 (модифицированная), т.к. в состав полиэкстракта уже входит ацетоновое извлечение из травы зверобоя продырявленного, что упрощает исполнение анализа. Учитывая принцип преемственности методов анализа «сырье — препарат» для количественного определения гиперицинов в траве зверобоя мы также предлагаем методику 4 (модифицированную.

Дубильные вещества Количество дубильных веществ в траве зверобоя продырявленного флоры Башкортостана определяли перманганатометрическим (методика 6) и комплексонометрическим (методика 7) методами (гл. 2.2.2.

Перманганатометрический метод дает представление о содержании в сырье не только дубильных веществ, но и всего комплекса окисляемых соединений, переходящих в водное извлечение (дубильных веществ, флавоноидов, оксикоричных кислот, аскорбиновой кислоты, органических кислот, аминокислот и т.д) [75.

Похожие диссертации на Фитохимическое изучение зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.) флоры Башкортостана и перспективы создания на его основе новых лекарственных средств [Электронный ресурс.